取出试剂盒置室温平衡30分钟。将20×洗涤液用蒸馏水做20倍稀释。加样品：将待检血清做1：10稀释（取100μl标本稀释液加入反应板孔内，再加10μl待检血清）混匀，同时预留阴、阳性及空白对照共5孔。
加入阴性对照3孔，阳性对照1孔，各100μl对照血清。空白对照1孔空置。将反应板轻轻震荡使样品混匀。温育：用封板膜封板后，置37℃温箱或水浴中反应30分钟。
洗板：温育后，将封板膜揭掉，吸干孔内液体，用洗涤液洗板5次，每次浸泡30-60秒钟。加酶标工作液：每孔加入100μl酶标工作液，空白孔除外。温育：用封板膜封板后，置37℃温箱或水浴中反应30分钟。
洗板：温育后，将封板膜揭掉，吸干孔内液体，用洗涤液洗板5次，每次浸泡30-60秒钟。显色：每孔加底物A、B液各50μl，轻轻震荡混匀，用封板膜封板后，置37℃温箱或水浴中反应10分钟。
终止：每孔加入终止液50μl，轻轻震荡混匀。测定：设定酶标仪波长于450nm（建议双波长450/630nm检测），测定各孔A450值。注意：在终止反应30分钟内读数。
当使用单波长时，校准空白孔，设定酶标仪波长于450nm，测定各孔A450值，当使用双波长450/630nm检测时，可以不设空白孔，测定各孔A值。

小鼠胚胎成纤维细胞 PA12细胞标本采集：
适用标本类型：血清或血浆。血清中的内源性干扰物如血脂、胆红素、血红蛋白在通常情况下不会影响实验结果。RF因子阳性、孕妇、AFP阳性标本不影响实验结果，HAV、HCV、乙肝等相关疾病抗体阳性标本通常情况下不影响实验结果。
标本采集：
血清：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入一5ml无菌的干燥玻璃管中(或含有促凝剂)，室温放置30min，2,000rpm离心3min，吸取上层血清，转移至一洁净的1.5ml离心管中，密闭送检。血清样本中混浊或有沉淀的样本应先离心或过滤后取澄清的液体进行检测，如果未充分沉淀，悬浮的纤维蛋白可能引起假阳性。
血浆：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入一5ml无菌的含有Na2EDTA或枸橼酸钠抗凝剂的玻璃管中立即轻轻颠倒玻璃管混匀5-10次以充分混匀，室温放置30min，2,000rpm离心3min，吸取上层血浆，转移至一洁净的1.5ml离心管中，密闭送检。标本中含有EDTA、柠檬酸钠、肝素钠等抗凝剂时，不影响结果。

小鼠胚胎成纤维细胞 PA12细胞标准：
空白孔（只加显色剂和终止液）的吸光度值应不大于0.08.阳性对照（PC）A450值大于0.30.阴性对照平均A450值小于0.08，如果质控是有效的，实验结果就是有效的。
结果判定：
每个实验结果独立使用，通过（Cut off）值判定结果。计算临界值：Cut off (C.O) =0.10+阴性对照平均（NC）A450值（当阴性平均A450值小于0.05时，按0.05计算；当阴性平均A450值大于或等于0.05时按实际值计算）。
阴性结果：标本吸光度值﹤临界值为阴性。阳性结果：标本吸光度值≧临界值为阳性。

试剂盒规格：
组份名称规格及数量(48T)规格及数量(96T)
HCMV-Ag包被板48孔板条96孔板条
阳性对照1支0.5ml1支0.5ml
阴性对照1支0.5ml1支0.5ml
标本稀释液1瓶6.0ml1瓶12ml
酶标工作液1瓶6.0ml1瓶12ml
浓缩洗涤液（20×）1瓶30ml1瓶50ml
底物A液1瓶3.0ml1瓶6.0ml
底物B液1瓶3.0ml1瓶6.0ml
终止液1瓶3.0ml1瓶6.0ml
自封袋1个1个
封板膜3张3张
说明书1份1份

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细胞株查询：

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鼠垂体瘤细胞，AtT-20细胞
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小鼠黑色素瘤细胞，B16-F1细胞
小鼠黑色素瘤细胞，B16-F0细胞
小鼠成纤维细胞，NCTC clone 929细胞
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小鼠肥大细胞瘤细胞，P815细胞
人肺腺癌细胞 Calu-3细胞
人胚肺转化细胞 SL-1细胞
人支气管上皮样细胞 BEAS-2B细胞
人胚肺二倍体细胞 HEL-2细胞
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人胚肺二倍体细胞 HEL-1细胞
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人胚肺成纤维细胞 CCC-HPF-1细胞
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